Cómo encontrar el pH del citoplasma

Potencial de hidrógeno o pH , es una medida de la acidez o alcalinidad de un líquido . Es importante en muchos campos , como la biología , la química y las ciencias ambientales . PH La medición es simple en la mayoría de situaciones . El papel de tornasol se puede insertar en el fluido, y el cambio en el color del papel identifica el grado en el que el fluido es ácido o base. En los casos en que el fluido a ensayar se dentro de una célula , otros métodos tienen que ser devised.Things que necesitará Página 2 ' , 7' -bis ( 2 = carboxietil ) -5 ( y -6 ) - carboxifluoresceína ( BCECF ) , u otra sustancia que tiene la variación de fluorescencia bajo diferentes condiciones de pH
espectrofotómetro de fluorescencia con dobles monocromadores , o instrumento similar para medir la fluorescencia
Centrifugar
ha Predeterminada curvas de calibración de medición de correlación de BCECF pH intracelular y citoplásmica

Mostrar Más instrucciones Matemáticas 1

Enfríe la temperatura de la muestra de células a 41 a 50 grados Fahrenheit . Esto permite una mejor velocidad de absorción del material fluorescente por las células.
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Cargar la muestra de células con una fluorescencia sustancia inductora tales como BCECF . Esto se hace mediante la adición de la BCECF al medio celular , entonces agitar la mezcla suavemente durante 2,5 horas . El BCECF se absorbe a través de la membrana permeable de las células .
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Separar las células del medio y cualquier BCECF no absorbido mediante la ejecución de la muestra a través de una centrífuga . Ponga las células en un recipiente aparte .
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Calentar la muestra de células a 98.6 grados Fahrenheit durante 30 minutos , para aproximarse a las condiciones dentro del cuerpo humano . Si las células bajo examen normalmente viven en algún otro medio ambiente que el cuerpo humano , ajustar la muestra a la temperatura apropiada .
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excitar la muestra de células por agitación. Esto ayuda a aumentar la actividad fluorescente.
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Medir la intensidad de fluorescencia de la muestra celular utilizando el espectrofotómetro . Para obtener los mejores resultados, utilice la luz de excitación a longitudes de onda de 500-510 nanómetros . En estas longitudes de onda , hay una mayor propagación de la intensidad de fluorescencia , lo que es más fácil para diferenciar los resultados. La intensidad de fluorescencia se mide en unidades relativas fluorescentes (RFU) , una relación de la luminosidad de la sustancia en un estado excitado , fluorescente a su estado normal, no excitado . Cuanto mayor sea la RFU , más brillante es la sustancia , en comparación a su estado normal.
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Comparar los resultados del espectrómetro para pre - dibujadas las curvas de calibración . En general , una mayor fluorescente significa un pH más alto dentro de la muestra . Con una longitud de onda de excitación de 510 nm , una sustancia con un pH de 6,4 mostraría una RFU de aproximadamente 20 , mientras que una sustancia con un pH de 9,9 mostraría una RFU de aproximadamente 55.