Ventajas y desventajas de Western Blot

Western blot, una técnica analítica utilizada para identificar una proteína específica en una muestra dada , emplea la capacidad de una enzima o anticuerpo primario marcado con fluorescencia para unirse a su antígeno específico. Es un proceso de tres pasos que comienzan con electroforesis en gel, seguido por transferencia de membrana y sondeo con anticuerpos. Detección de la proteína puede ser directa o indirecta , con este último utilizando un anticuerpo secundario marcado dirigido contra el primario. Aunque aceptado como una técnica de análisis de proteínas rutina , western blot tiene limitaciones, así como los beneficios . Ventaja: Sensibilidad

Uno de los mayores argumentos a favor de western blot es su sensibilidad . Debido a su capacidad de detectar tan poco como 0,1 nanogramos de proteína en una muestra , la técnica puede servir teóricamente como una herramienta de diagnóstico temprana eficaz , incluso de detección de la respuesta inmunogénica menor de un virus o bacterias en una muestra de paciente . Un Western blot más indirecta se basa en esta sensibilidad de la capacidad del anticuerpo secundario para amplificar la intensidad de la señal detectada por el sistema de formación de imágenes. Mayor sensibilidad significa que se necesitan menos anticuerpos para la prueba , lo que reduce los costos de laboratorio significativamente
Ventaja: . Especificidad

La técnica de western blot debe su especificidad a dos grandes contribuyente factores. En primer lugar, la electroforesis en gel ordena una muestra en proteínas de diferente tamaño, carga , y conformación. Este proceso en sí mismo es un gran paso hacia la detección , como bandas formadas en el gel ya dan pistas sobre el tamaño de la proteína o polipéptido de interés. La especificidad de la interacción antígeno-anticuerpo sirve como el segundo factor grande. Debido a que los anticuerpos específicos muestran afinidad por proteínas específicas , el proceso puede detectar selectivamente una proteína diana , incluso en una mezcla de 300 mil proteínas diferentes
Desventaja: . Propenso a resultados falsos o subjetivos

a pesar de su sensibilidad y especificidad , un western blot puede aún producir resultados erróneos . A los resultados falsos positivos cuando un anticuerpo reacciona con una proteína no previsto , que es lo que sucede con frecuencia cuando un paciente que está siendo probado para el VIH pasa a tener tuberculosis o un número de infecciones parasitarias . Un falso negativo , por otro lado, puede resultar fácilmente si no se les da las proteínas más grandes de tiempo suficiente para transferir correctamente a la membrana. Transferencia y el procesamiento incorrecto menudo producen sesgada , se desvanecieron , o incluso múltiples bandas , por lo que los resultados de pruebas sujetas a la interpretación de que el técnico
Desventaja: . Alto Costo y demanda Técnica

El costo de una transferencia western es un compuesto de los grandes gastos individuales de anticuerpos etiquetados , analistas especializados y equipos de laboratorio . Un proceso delicado , el Western Blot requiere precisión en cada paso para la correcta identificación de los componentes de una muestra. Un pequeño error en la concentración de reactivo o en periodo de incubación puede ser desastroso para todo el proceso. Por último , el equipo necesario para la detección y la imagen - quimioluminiscente , fluorescentes , radiactivos , o los sistemas de detección láser - puede ser demasiado caro para la unidad de media microbiología

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