¿Cómo hacer crecer células apicoplast de un parásito en una Cultura

apicoplasts son un tipo de orgánulo intracelular presente en los parásitos unicelulares que causan enfermedades graves como la malaria , toxoplasmosis y coccidiosis. Orgánulos son estructuras complejas dentro de una celda que no pueden crecer y reproducirse por sí mismos. Ellos surgieron cuando un antepasado de los parásitos engulló otro organismo, que probablemente se relaciona con las algas rojas . Debido a apicoplasts no son células independientes , que no se pueden cultivar en una cultura por sí mismos . Para crecer hay que crecer los parásitos. Lo que sigue son instrucciones a la cultura de la etapa de los glóbulos rojos de Plasmodium falciparum , que causa malaria.Things que necesitará
Parásito Stock
RPMI 1640 medio de cultivo
campana de flujo laminar
Autoclave
Albumax sustituto de suero II
D -glucosa
hipoxantina
HEPES
sulfato de gentamicina
frascos Cultura
incubadora Móvil
glóbulos rojos
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el cultivo de Plasmodium falciparum Matemáticas 1

ajuste el incubador de células a 37 grados Celsius y ajustar la composición del gas al 1 por ciento de oxígeno , dióxido de carbono del 3 por ciento , y el 96 por ciento de nitrógeno .
2

Autoclave todos los equipos y materiales no estériles
3

Trabajar en la campana de flujo laminar para mantener la esterilidad , preparar el medio final añadiendo lo siguiente al medio de cultivo RPMI 1640 :

D-glucosa a una concentración final de 20 mM .

hipoxantina a una concentración final de 0,2 mM .

HEPES a una concentración final de 25 mM .

sulfato de gentamicina a una concentración final de 25 mg /L.

Albumax II a una concentración final de 0,5 por ciento w /v
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Distribuir la cantidad total de medio de hecho en el paso anterior en tantos frascos de cultivo como deseaba y colocarlos en el agitador en la incubadora.
5

vez que el medio ha alcanzado los 37 grados centígrados, añadir el caldo de parásitos .
6

Cambie el medio de cultivo cada día para mantener los parásitos bien alimentados y vivos .
7

Añadir las células rojas de la sangre cada dos días. Ellos serán infectados por los nuevos parásitos que se están generando en la cultura. Si se vuelven demasiados para un frasco , divide su contenido en dos o más adicionales queridos.