Actividad basal del promotor SP6

En experimentos in vitro son los realizados fuera de un organismo vivo en un tubo de ensayo o entorno similar . Los científicos pueden hacer copias de ARN o transcripciones de un gen in vitro a través de un proceso llamado transcripción in vitro . La enzima que hace que la transcripción de ARN basado en el gen se llama una ARN polimerasa . Uno de estos es la molécula de polimerasa SP6 . Se requiere un tramo de ADN llamado el promotor SP6 para poder funcionar correctamente. Promotores

Un promotor es la región de ADN unido por una ARN polimerasa para iniciar la transcripción. El SP6 polimerasa requiere que una secuencia muy específica esté presente en el promotor a fin de obligar , así que cuando se utiliza el SP6 polimerasa para la transcripción in vitro , el gen debe contener el promotor SP6 para la transcripción que se produzca. La polimerasa SP6 es de un tipo de virus llamado un bacteriófago; empresas de biotecnología producen esta polimerasa mediante la infección de bacterias de Salmonella con fagos y, posteriormente, el aislamiento de la polimerasa .
Expresión

expresión o actividad basal se refiere al nivel de expresión en ausencia de otras moléculas que aumentar o disminuir el nivel de transcripción . Activadores o represores , por ejemplo, son proteínas que pueden unirse al promotor o a otras regiones reguladoras de genes y, o bien ayudar en el reclutamiento de la ARN polimerasa o prevenir su unión . Los inductores son moléculas que estimulan la producción del producto génico al elevar los niveles de expresión .
SP6

La actividad basal del promotor SP6 variará dependiendo de las condiciones de su experimento. La consideración más importante, por supuesto , es cómo sus condiciones experimentales pueden afectar la actividad y cómo SP6 se compara con otros sistemas. En general , SP6 polimerasa y promotores entregan menor eficiencia que los sistemas de transcripción de T3 in vitro T7 o , aunque en condiciones ideales SP6 es más o menos comparable a estos otros dos. Como SP6 , tanto T7 y T3 utilizan una ARN polimerasa del bacteriófago .
Condiciones

La concentración de sal y la temperatura son dos factores importantes para determinar la actividad basal. SP6 es muy sensible a la concentración de sal, para concentraciones más altas de sal pueden disminuir en gran medida su actividad . Todo lo demás queda igual , la expresión es significativamente mayor a 104 grados Fahrenheit que a 99 grados Fahrenheit . Concentración de nucleótidos es otra consideración importante . Las bajas concentraciones potencialmente pueden causar la transcripción de rescindir prematuramente y con ello disminuir su eficacia. El aumento de la concentración de nucleótidos evitará este problema. Si va a sintetizar sondas de ARN , sin embargo , añadir demasiado nucleótidos no marcados disminuirá la cantidad de nucleótido marcado en el producto final .